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這是一份詳細、專業的 Mini Trans-Blot® 小型轉印槽技術參數及使用說明書。本說明書綜合了通用操作流程、關鍵參數和注意事項,適用于這類標準垂直槽式濕轉印系統。
一、伯樂Mini Trans-Blot® 小型轉印槽產品概述
Mini Trans-Blot® 小型轉印槽是一種用于 Western Blot(蛋白質免疫印跡)實驗的垂直槽式濕法轉印裝置。其核心功能是在電場作用下,將經過SDS-PAGE凝膠電泳分離的蛋白質,從凝膠上原位、定向地轉印到固相支持膜(如PVDF膜或硝酸纖維素膜)上,以進行后續的免疫檢測。
二、伯樂Mini Trans-Blot® 小型轉印槽技術參數
凝膠容量:2塊
凝膠尺寸:10 x 7.5
推薦電源:PowerPacBasic或PowerPac Hc
應用:Western雜交、核酸轉印
尺寸:12 x 16 x 18 cm
重量:0.75 kg
緩沖液:450 ml
效率:1小時內轉印2塊10x7.5cm凝膠
轉印凝膠夾:2個可夾10 x 7.5 cm 凝膠
高質量:轉印小型凝膠
型號:1703935、1703930
三、系統組件清單
1、轉印槽主體:帶電極和蓋子的透明槽體。
2、凝膠夾板(“三明治"夾):一對黑色和透明的塑料夾板,用于固定轉印“三明治"。
3、海綿墊:至少兩塊,用于提供均勻壓力和支持。
4、濾紙墊片:至少兩張,尺寸略大于凝膠和膜。
5、冰盒(冷卻芯)(可選配件):插入槽內,用于在轉印時降溫。
6、電源導線:紅色(正極,陽極)和黑色(負極,陰極)。
四、操作步驟(濕轉印法)
A、轉印前準備
1、配制緩沖液:根據實驗要求配制足夠的轉印緩沖液(如Tris-甘氨酸緩沖液、Towbin緩沖液等),并預冷至4°C。
2、制備膜和濾紙:將PVDF膜在甲醇中浸泡15秒活化,然后與濾紙、海綿墊一同放入轉印緩沖液中平衡至少15分鐘。
3、制備凝膠:電泳結束后,小心撬開玻璃板,切去濃縮膠和多余部分,將目的蛋白所在的分離膠放入轉印緩沖液中平衡。
B、組裝“三明治"
關鍵原則:始終在盛有緩沖液的托盤中進行,防止夾入氣泡。
1、將凝膠夾板的透明面(陰極側,對應負極)向下打開。
2、依次在夾板上放置:
海綿墊
濾紙
凝膠(正面朝下)
膜(精確對齊覆蓋凝膠,避免移動)
濾紙
海綿墊
3、小心地合上黑色夾板(陽極側,對應正極),確保各層對齊、無氣泡。聽到“咔噠"聲表示夾緊。
4、將組裝好的凝膠夾板插入轉印槽的卡槽中,確保黑色夾板面對紅色正極(陽極),透明夾板面對黑色負極(陰極)。即:凝膠在負極側,膜在正極側(蛋白質帶負電,向正極移動)。
C、進行轉印
1、將轉印槽置于冰水浴中,或連接好外接循環冷卻水系統。
2、向槽內灌滿預冷的轉印緩沖液,確保浸沒凝膠夾板。
3、蓋上槽蓋,連接電源:紅線接紅端(陽極),黑線接黑端(陰極)。
4、設置電源參數:
恒壓法(常用):設定 100V,轉印60-90分鐘(分子量標準)。
恒流法:設定 250-300 mA,轉印60-90分鐘。
高分子量蛋白:可采用 30V 恒壓過夜轉印。
5、啟動電源,開始轉印。過程中會產生熱量,必須確保有效的冷卻。
D、轉印后處理
1、轉印結束后,關閉電源,斷開導線。
2、取出凝膠夾板,拆開,用鑷子小心取出膜。
3、用麗春紅S染液或立春紅染膜液快速染色,檢查轉印效率。也可直接進行后續的封閉和免疫雜交步驟。
五、維護與保養
1、每次使用后,用去離子水清洗所有部件(槽體、夾板、海綿、冰盒等),晾干后保存。
2、避免刮擦電極(鉑金絲),切勿用硬物接觸。
3、定期檢查電極是否腐蝕或斷裂。
4、海綿和濾紙為消耗品,多次使用后若變形或破損應及時更換,以保證壓力均勻。
5、長期不用時,將所有部件干燥存放于清潔處。